用tcbs培养基能不能直接进行弧菌计数

2025-04-07 16:07:05
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回答1:

应该不可以,以下是标准技术规程:
弧菌数量—平板计数法

培养基

  —— 计数培养基BTB:牛肉膏3.0g, 蛋白胨10.0g,蔗糖15.0g,氯化钠20.0g,Teepol 1.0g, 溴麝香草酚蓝0.06mg,蒸馏水1000mL。配制方法:将上述数量的牛肉膏、蛋白胨、蔗糖、氯化钠和Teepol加热溶解于1000mL蒸馏水中, 用16%的氢氧化钠调整pH为7.8,再将溴麝香草酚蓝按上述量溶解其中。分装于试管(每管5mL)中,塞棉塞,包装后于115℃高压蒸气灭菌20min, 然后于冰箱中冷藏备用。

  —— 平板分离培养基TCBS:蛋白胨10.0g, 酵母膏5.0g,柠檬酸钠10.0g,硫代硫酸钠10.0g, 蔗糖20.0g,胆盐8.0g, 氯化钠10.0g,柠檬酸铁1.0g, 溴麝香草酚蓝0.04g,麝香草酚蓝0.04g,琼脂15g,蒸馏水1000mL。配制方法:将上述数量的蛋白胨、酵母膏、柠檬酸钠、硫代硫酸钠、蔗糖、胆盐、氯化钠、柠檬酸铁、溴麝香草酚蓝和麝香草酚蓝加热溶解于1000mL蒸馏水中,调节pH为8.6,在加热至沸腾。然后冷却至55℃, 倾注无菌培养皿即可。该培养基不需要高压灭菌。

  —— PAC斜面培养基:蛋白栋5.0g,酵母膏2.5g, 葡萄糖1.0g,氯化钠10.0g, 琼脂15.0g,蒸馏水1000mL。配制方法:将上述量蛋白栋、酵母膏、葡萄糖、氯化钠和琼脂加热溶解于1000mL蒸馏水中, 调节pH为7.0,分装于试管(每管5mL)中, 塞棉塞,包装后于高压蒸汽灭菌锅中115℃灭菌20min。灭菌后立即取出装有上述培养基的试管,倾斜放置于实验台面上,使其冷却后培养基在试管内形成斜面。放置冰箱中冷藏备用。

  —— 弧菌的分离和计数:采用9管“MPN”法以3个不同稀释度(原水样、10-1和10-2)的水样接种于BTB培养液的试管中, 37℃培养18h, 把阳性管中的菌液于TCBS平板上划线分离, 平板放进培养箱里, 于37℃培养18h,将出现的绿色、蓝绿色和黄色菌种接种于PCA斜面上保存。分离菌株首先经革兰氏染色、氧化酶、运动性和0/129弧菌素敏感实验等,符合弧菌特征的菌株,视其来源的“MPN”管数, 查“MPN”表进行计数。