①用高倍镜观察线粒体时，需要用健那绿将线粒体染成蓝绿色，而藓类小叶中有绿色的叶绿体会干扰实验，故①错误；
②观察有丝分裂及低温诱导染色体数目变化均可用洋葱根尖作实验材料，故②正确；
③观察植物细胞失水和吸水及叶绿体中色素的提取和分离均可用绿色植物成熟叶肉细胞作实验材料，故③正确；
④模拟减数分裂中染色体的变化及探索血糖平衡的调节均可用模型构建的方法，故④正确；
⑤对提取的胡萝卜素粗品进行鉴定及分离叶绿体中的色素均可用纸层析法，故⑤正确．
则说法正确的有②③④⑤．
故选：D．
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