A、重组质粒的构建需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶参与，DNA聚合酶一般用于DNA复制过程，故A选项错误；B、③侵染植物细胞后，重组Ti质粒上的T-DNA整合到棉花细胞的染色体上，故B选项错误；C、如果受体细胞的染色体上若含抗虫基因，但不代表该基因就一定成功表达，因此不能确定⑤是否表现出抗虫性状，故C选项错误；D、⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异，故D选项正确．故选：D．
