购买BIOG的核酸提取试剂盒就有说明书的,现在操作很方便了,磁珠法提取基因DNA要看实验用的样本是什么的。
请自行准备:无水乙醇、异丙醇、1.5mL离心管,生理盐水。
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取出洗涤液,按70%比例加入无水乙醇,如6mL加入14 mL无水乙醇,12mL加入28 mL无水乙醇,混匀。
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取10-20mg左右的组织,用液氮研磨为粉末,转入1.5mL 离心管内,加入100 μL 生理盐水,振荡15秒 (或直接在100 μL 生理盐水中将组织匀浆为细胞悬液),加入200 μL 裂解液, 20 μL 复合消化液,充分混匀,56℃温育12分钟(如组织匀浆不充分,可适当延长消化时间至组织完全消化)。
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冷却到室温,加入300μL异丙醇,充分混匀,再加入20μL磁珠复合液(每次使用前须充分混匀),振荡混匀3min(注意不要颠倒混匀,以防磁珠粘附于管盖内壁),静置2min。
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将离心管置于磁力架上放置约20s至磁珠完全吸附,开盖,彻底吸弃上清液(注意枪头不要接触磁珠)。
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加入800μL配制后的洗涤液,将离心管从磁力架上取下,充分振荡2min,确保磁珠完全分散。将离心管置于磁力架上放置约20s至磁珠完全吸附,开盖,彻底吸弃上清液(注意枪头不要接触磁珠)。
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将离心管从磁力架上取下,开盖,干燥约3-5min,至无明显乙醇气味。
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加入50-100 μL洗脱液,振荡至磁珠充分散开,室温静置2min,再振荡混匀1min。
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将离心管置于磁力架上,待磁珠完全吸附后,小心吸取上清液至一新的1.5mL离心管中,提取的核酸可直接用于下游实验,或-20℃保存备用。
裂解-结合-洗涤-洗脱
自动化吗?我一般用的是试剂盒提取。