透明质酸中的蛋白质指的是一种蛋白聚糖中的蛋白质吗,是否应该考虑除去其中的糖胺聚糖,将蛋白质纯化,因为考马斯亮蓝需要与蛋白质结合才能显色,样品中的糖胺聚糖可能有影响,或者是样品污染
考马斯亮蓝溶液应为酸性,并且变成蓝绿色是就不能再使用了
实验时一定要最后加入蛋白质溶液,
另外,样品中的Tris、乙酸、2-巯基乙醇、EDTA等物质对实验结果有少量颜色干扰,可以在做标准曲线时可以用缓冲液代替蒸馏水,就可以将干扰扣除,
但是大量的去污剂如SDS对颜色的影响太大不容易去除,只能想办法从样品中去除去污剂,
请问你做好标准蛋白曲线了吗?我这两周做的也是蛋白测定的实验,测定的吸收峰不规律的主要原因应该是试剂的问题,现在市售的很多蛋白和亮蓝质量都很差劲,亮蓝即使是进口的效果也不好,(我的最先买的试剂,标准蛋白都测不到吸光度)建议你找个大点的公司,试剂换一下,结果应该就会好了,亮蓝跟蛋白的结合专属性还是很强的,这个方法应该不用怀疑