什么时候要用两种限制酶切了？把目的基因与载体切好后，聚合，会有目的-目的、载体-载体、目的-载体的基因，要的是目的载体的那一部分，然后就需要标记基因了
目的基因和载体要用同一种限制性核酸内切酶切割，不然就没法连了。用不同的限制酶切两端，防止载体自连或目的基因自连。
