A、只有活细胞才能发生细胞质壁分离及复原，该实验中未观察到质壁分离现象，原因可能是所取洋葱表皮细胞为死细胞，A正确；
B、质壁分离的外因是外界溶液浓度大于细胞液浓度，该实验中未观察到质壁分离现象，原因可能是KNO3溶液浓度可能低于细胞液浓度，B正确；
C、洋葱鳞片叶内表皮细胞属于成熟的植物细胞，在高浓度的外界溶液中能发生质壁分离，由于没有液泡中色素，妨碍观察，C错误；
D、细胞在一定浓度的KNO3溶液先发生质壁分离，由于细胞能主动吸收钾离子和硝酸根离子，导致细胞液浓度上升，发生渗透吸水，即质壁分离的复原，D正确．
故选：C．
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