简述植物组织培养的步骤

植物组织培养方法
1
MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存
MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50
mL)或1/200(5
mL)，加水稀释，制成培养液。现将制旦肆腊备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ)
mg/L
NH4NO3
33
000
KNO3
38
000
CaCl2·2H2O
8
800
MgSO4·7H2O
7
400
KH2PO4
3
400
微量元素(母液Ⅱ)
KI
166
H3BO3
1
240
MnSO4·4H2O
4
460
ZnSO4·7H2O
1
720
Na2MoO4·2H2O
50
CuSO4·5H2O
5
CoCl2·6H2O
5
铁盐(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O
5
560
Na2-EDTA·2H2O
7
460
有机成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇
20
000
ⅣB
烟酸
100
盐酸吡哆醇(维生素B6)
100
盐酸硫胺素(维生素B1)
100
甘氨酸
400
以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1
L的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1
L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450
mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1
L，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1
mg/mL)。其配制方法是:分别称取这3种物质各10
mg，将2，4-D和NAA用少量(1
mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1
mL)的物质的量浓度为0.1
mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100
mL，即得质量浓度为0.1
mg/mL的母液。
配制培养液
用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量:母液Ⅰ为50
mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5
mL。再取2，4-D
5
mL、NAA
1
mL，与各种母液一起放入烧杯中。
配制培养液时应注意:①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制;②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;③量取母液雹拍时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
溶化琼脂
用粗天平分别称取琼脂9
g、蒸糖30
g，放入1
000
mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750
mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1
000
mL，搅拌均匀。
调pH
用滴管吸取物质的量浓度为1
mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.4~7.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8)。
2
BA为细胞分裂素
NAA
是萘乙酸，为生长素的一种
3
适于百合根的激素暂时没找到
以下是叶片和胚的激素:对麝香百合
(LiliumlongiflorumThunb)叶片进行离体培养
,可成功获得无菌苗。试验结果表明
:培养基MS
+BA
0
1mg/L
+NAA
1
0mg/L适于初代培养
,有助于根和芽的分化
;MS
+BA
0
5mg/L
+NAA1
5mg/L适于增殖培养
,利于愈伤组织的产生
,并促进芽的分化
;生根培养基为
1/
2MS
+NAA
1
0mg/L
+多效唑
10
0mg/L
;当试管苗根长
1cm时移栽易成活
在含有1
mg/
L
IAA,1
m
g/
L
GA3,6
0
0
m
g/
L
CH的
MS培养基上培养
,蔗糖含量为
6
%~
8%时
,百合幼胚胚性生长最好
,培养
30
d后可以得到正常胚
.在含有
0
.1
m
g/
L
NAA,1
m
g/
L
BA的
MS培养基上可以形成淡绿色的愈伤组织
,将这些愈伤组织转移到
1
/模滑
2
MS无激素的培养基上培养可以形成大量的不定芽
,不定芽生根移栽后
,其成活率可达90
%以上

植物组织培养可以分为四个阶段：
（1）建贺慎立无菌体系，即外植体及培养基的消毒、接种，获得愈虚拍派伤组织或器官。
（2）进行增殖，不断分化产生新的植株，或直接产生不定芽及胚状体，也可以根据需要反复进行继代培养，以达到大量繁殖的目的。
（3）将植株转移进行生根培养，可以转入生根培养基，也可以直接切取进行扦差贺插生根。
（4）试管苗过渡，即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。

一，培养基母液的配置
以常用的MS培养基为例来讲
，我们需要配置的有大量元素，微量元素，Fe盐，有机成分，植物生长调节物质母液;按照你所需要的浓缩倍数来进行配置，如我们用的是大量元素20倍。微量元素200倍
，Fe盐100倍，有机成分200倍；培养基母液的仔橘绝划分部分有时会根据各实验伍丛室的情况来划分，不过基本的原理都是相同的！！
二培养基配置与灭菌
植物组织培养的整个过程都是在无菌的条件下进行的，因此，我们所有的实验器具，材料，培养基等等都需要在无菌的条件下进行。
培养基的配置分为几个部分（这里以常用的固体培养基为例进行讲述）
1
各种母液念姿的量取
2
蔗糖和琼脂的称量
3
培养基的熬制
4
定容
5
分装
培养基分装好以后就进行高温灭菌。
三
植物材料的消毒与接种