A、目的基因的核苷酸序列都不一定是已知的，A错误；B、接受外源基因的转基因植物仍然是原物种，不是新物种，B错误；C、由于基因的选择性表达，人肝脏细胞中胰岛素基因不表达，因此没有胰岛素原的mRNA，C错误；D、DNA连接酶、限制性核酸内切酶及载体是构建重组DNA分子必需的工具，D正确．故选：D．
