植物悬浮细胞能不能够在静止状态下进行培养
实验原理:
植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态。植物离体培养可产生愈伤组织。将疏松型的愈伤组织县浮在液体培养基中并在振荡条件下培养一段时间后,可形成分散县浮培养物。良好的县浮培养物应具备以下特征:(1)主要有单细胞和小细胞团组成;(2)细胞具有量盛的生长和分裂能力,增殖速度快;(3)大多数细胞在形态上应具有分生细胞的特征,它们多呈等径形,核一质比率大,胞质浓厚,无液胞化程度较低。
在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养,因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说,细胞在培养到第18~25d 时达到最大的密度,此时应进行第一次继代培养。在继代培养时,应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系,就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作,特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株,即可获得携带有目标基因的个体。
主要试剂:
B5培养基加上0.2mg NAA(naphthalene acetic acid)的液体培养基(取3.2g B5粉末培养基,蔗糖30g,200ul体积质量为1mg/ml的NAA贮备液,溶于约800ml蒸馏水中,置于磁力搅拌器上混合均匀,pH计测定pH 值,1mol/l KOH调节pH值至5.8,加蒸馏水定容至1L,铝箔纸封口后121℃灭菌20min,贮于4℃冰箱,接种前水浴或自然升至室温)。