利用普通RT-PCR技术克隆目的基因时,出现了特异性扩增条带,是为什么?

2025-04-05 01:18:15
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回答1:

从题目来看,作者应该是要表达为什么会出现非特异性条带的?

1、出现特异性条带是正确的现象。

说明:实验本身就是想要特异性条带的,这也是我们实验的最终目的。

2、非特异性条带的原因

  • 引物的扩增效率不好,特异性扩增效率不高,导致了非目的片段的无效扩增
  • 扩增酶的保真性和特异性不好
  • 扩增程序的问题,应该根据实际长度调整实验参数。

3、当然还有一个原因

就是rt-PCR的产物和DNA水平的产物并不是特异性的,因为DNA中有内含子的存在,当目的基因是跨外显子的,那么RNA水平的扩增需要排除内含子的长度。