如果重复序列比较多，还是请选择再延长一点5’段，避免引物错配。
一般的PCR体系用来扩增800bp以内的片段效果还可以，上了1000bp，我们都推荐使用LATaq酶，或者其他长片段酶，并延长退火时间，保证长片段可以完整复制。
请你查查你的序列，看看750bp处是否有容易与引物错配的序列，如果没有，延长退火时间、降低退火温度试试；如果有，降低退火温度或者从新设计引物吧。
500-2K的比较多
一般来说2K以上就算长片段PCR了…普通的PCR酶活性、错配什么的问题就严重了
所以这个时候要考虑买贵点的酶了…偶实验室用的TaKaRa的，ExTaq扩4K以内的没问题的，更贵的有个给长片段PCR专用的酶LATaq，号称能P 31K的，偶只拿来P过8500的一个片段，效果很不错
现在的酶都挺好用的，一般p个几kb没问题的呀？
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