【爬片的准备】
1、爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片;
2、应用盖玻片,可根据自己的需要剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板;
3、将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是冲洗干净就可以了),放在饭盒或者培养皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后进行高压消毒。
【培养板的准备】
1、 泡酸过夜
2、 冲洗,烘干(1、2步骤与前大致相同)
3、 放入超净工作台用紫外线照1~2小时就可以用了(在照之前可以将爬片一并放入,若细胞贴壁能力不强,可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话,就可以省略了,进行紫外线消毒)
注: 此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内,紧接着放入培养板内。目的:浸过PBS的爬片依靠表面的液体,可以用培养板孔底贴和紧密,以利于细胞长到爬片上。(自己刚开始做的时候,经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间,爬片上细胞罕见。)
【细胞爬片】
1、 胰酶消化细胞后计数
2、 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可
3、 第二天即可进行干预措施
多聚赖氨酸的浓度要求应该不严格,主要就是将贴壁能力弱的细胞固定上去,如0.1%(w/),消毒可用紫外线照射。
园子里搜到的玻片的处理方法:
玻片泡酸,自来水冲洗数遍,去离子水冲洗,就像细胞培养瓶等的那种处理就可以。然后放在小饭盒或者玻璃皿里高压灭菌。再烤干备用。
将玻片用灭菌镊子放于培养皿中,加细胞。整个过程注意无菌操作就是了。也没啥难的。
要注意的是:
1.泡过酸的玻片特别脆。用镊子夹着过水。要冲得充分,和那些细胞培养用玻璃管,瓶等的原则一样。
2.如果你觉得玻璃片太大。可以在泡过酸,水冲洗过用磨石在玻璃片上划痕,掰开。我曾将一个玻璃片分成4个小片,在12孔,24孔板里放一两片那种。
3.有个问题我一直没有解决好:就是加上培养基后玻璃片拿动培养皿时,玻璃片会窜,常会压到长在皿底部的细胞。挺麻烦的。后来还发现在玻璃片上的细胞和长在皿底部的细胞形态有点不一样。现在我已经不做爬片了,直接在皿里做免化等也不错。