分类不一样哦,我慢慢打。
一、直接法:荧光素直接标记在探针上,很显然这个更方便,步骤少啊。
间接法:通过化学法或酶法在探针上引入一个标记物,如DIG,Biotin等半抗原,然后通过免疫亲和作用,引入荧光素信号。这个信号会好,但是步骤比较多。
二 、另一个分类:非酶标记和酶法标记,不过现在酶法标记很常用了,因为快速方便且检测方法都在突飞猛进......
酶法标记
1 Klenow进行随机引物标记 优点不少,核苷酸标记物掺入绿比较高,有效标记DNA量也多,标记100-500bp最好,产量可能要比缺口平移法少一些。
2 DNA Pol I / DNase I进行缺口平移标记 基本都是大片段标记1000以上的,这种方法生产常见,成本低且易操作,快速,信号可能低一点。上面这俩方法现在大片段探针标记常用.
3 PCR 方法进行标记(Taq DNA Polymerase,/Pwo DNA Polymerase or Expand),这个常见了,特点就是高特异性,小片段能有很好的标记效果,一个两个碱基都可以检测,就是设计引物非常麻烦,可已查到很多相关文献。
4 寡核苷酸3´-标记或用末端转移酶加尾标记DNA,这个是在探针3'端形成一个尾巴,可以加上其他片段产生高比活性的探针,一般用于克隆序列坚定和基因组DNA样品的点突变检测和原位杂交。
5 用SP6-, T3- or T7 RNAPolymerases*进行体外转录标记RNA,这个是标记RNA探针的,但是可用于转录DNA质粒的制备,商品上常用,所以我就列上了
其他RNA探针标记不写了,还有一个用AMV/M-MuLV合成cDNA,也是逆转录,但是这个我不大了解,抱歉。
三 还有一个分类是安标记物分的,放射性核算标记和非放射性核算标记。
放射性核算标记可通过放射自显影使其标记的探针得到检测。
非放射性的:1碱性磷酸酶AKP显示系统。2辣根过氧化物酶HRP显示系统。3 ABC显示系统:abc是亲和素-生物素-酶复合物,酶也是选用AKP\HRP,然后各自的酶的显色系统显示。这三种均为显色反应。
就知道这些,不知是否有用
http://baike.baidu.com/view/938289.htm#2