A、两个具有相同末端的DNA片段连接起来，A错误；B、将具有相同的黏末端的DNA分子连接，作用于脱氧核糖与磷酸之间的切口形成磷酸二酯键，B错误；C、DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，C正确；D、具有粘性末端的DNA分子碱基对之间的氢键可自动生成，D错误．故选：C．
