A、实验探究的是培养液中酵母菌种群数量的变化，因此为了避免其它杂菌对酵母菌数量的影响，在实验前应对培养液和培养用具进行灭菌处理，A正确；
B、由于后期培养液中菌体数量多，不易计数，因而为了便于计数先要进行稀释再计数，B正确；
C、培养过程中，酵母菌可能会沉在试管底部，如果取样取的是试管底部，实验数据则会偏大，如果取样取的是试管上部，则实验数据则会偏小，因此制片前要轻轻震荡试管使酵母菌分布均匀，C正确；
D、探究培养液中酵母菌种群数量的变化实验中，使用血细胞计数板记数前，先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让其自行渗入，D错误．
故选：D．
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