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Western blot化学发光(ECL)时，胶片上条带很弱怎么办?

2025-04-07 06:48:14

推荐回答（2个）

回答1：

条带弱的原因可能有以下几个方面：
①.因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整，目前国产试剂盒中上海炎熙生物的极敏型ECL试剂盒灵敏度最高了，达到了pg级别，很合适表达不高的蛋白。
②. 蛋白没有充分转移到膜上。
③. 抗体效价不高，用量不足，孵育时间太短，或抗体反复使用保存不当而失活。
④. 曝光时间太短。可适当延长曝光时间。

回答2：

因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整，目前国产试剂盒中上海炎熙生物的极敏型ECL试剂盒灵敏度最高了，达到了fg级别，很合适表达不高的蛋白。