溶液出现绿色是因为有微量的还原反应。虽然理论上淀粉应该不被蔗糖酶(转化酶)催化,但实际操作时总有各种误差,比如:
长时间反应产生的微量水解:即使没有催化剂,长时间加热也可能有微量的淀粉被水解。如果淀粉不纯,配试剂的水不纯,溶液有一定的酸性,都会加快水解。
酶的纯度较低,混有杂质,或者用错了酶都有可能。可以叫蔗糖酶的有3种,应该用的是转化酶(EC 3.2.1.26)。如果用了蔗糖α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.48)就会催化淀粉水解。不过那样就应该有砖红色沉淀了。但是用的转化酶纯度不够,含有一些杂质是有可能的。
总之,有微量的还原糖出现,产生微量氧化亚铜,与试剂的蓝色混在一起,就出现了绿色。其实这个反应的溶液变色过程就是这样,先变绿,再变灰色、棕色等,最后出现砖红色沉淀。有微量反应,就出现中间的颜色。反正没有砖红色沉淀,就可以算作阴性。
如果测试样本是还原糖,混合物中会形成砖红色的沉淀物。这是因为还原糖会将硫酸铜中的二价铜离子(Cu2+)还原成一价铜离子(Cu+),并以氧化亚铜(Cu2O)的形式沉淀出来。如果溶液中还原糖含量较低,产生的氧化亚铜便会相应减少,因此试验后可能只会出现绿色、混浊的黄色或橙色沉淀物。