悬浮细胞如何贴壁

贴壁细胞分为两种,上皮细胞型和成纤维细胞型,在显微镜下观察时,贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形,而且晃动培养液时,细胞不动.
悬浮细胞漂在培养液中,呈圆形,晃动培养液时细胞也随着漂动。
所谓的贴壁培养是指大多数动物细胞在离体培养条件下都需要附着在带有适量正电荷的固体或半固体的表面上才能正常生长，并最终在附着表面扩展成单层。其基本
操作过程是：先将采集到的活体动物组织在无菌条件下采用物理(机械分散法)或化学(酶消化法)的方法分散成细胞悬液，经过滤、离心、纯化、漂洗后接种到加
有适宜培养液的培养皿(瓶、板)中，再放入二氧化碳培养箱进行培养。用此法培养的细胞生长良好且易于观察，适于实验室研究。但贴壁生长的细胞有接触抑制的
特性，一旦细胞形成单层，生长就会受到抑制，细胞产量有限。如要继续培养，还需将已形成单层的细胞再分散，稀释后重新接种，然后进行传代培养。
而悬浮培养是指少数悬浮生长型动物细胞在离体培养时不需要附着物，悬浮于培养液中即可良好生长。悬浮生长的细胞其培养和传代都十分简便。培养时只需将采集
到的活体动物组织经分散、过滤、纯化、漂洗后，按一定密度接种于适宜培养液中，置于特定的培养条件下即可良好生长。传代时不需要再分散，只需按比例稀释后
即可继续培养。此法细胞增殖快，产量高，培养过程简单，是大规模培养动物细胞的理想模式。但在动物体中只有少数种类的细胞适于悬浮培养。

我养得细胞是RAJI,属于悬浮细胞,正准备做激光共聚焦,虽然我现在还没开始,但我们这儿条件还比较成熟,其具体过程如下:

1.清洁，包被血盖片：在80ml三蒸水和120ml95％乙醇中溶解20gNaOH，将血盖片浸泡在里面，在摇床上振荡2h。然后用三蒸水洗净，烘干。使用0.01%的多聚赖氨酸溶液浸泡血盖片，在摇床上振荡30min。然后用三蒸水洗净，晾干。
将血盖片保存在干燥密封的环境中，4℃避光，以备用于激光共聚焦显微镜实验。
2.准备细胞培养池：每个培养池加1×106左右（具体细胞数量视实验要求而定）的细胞悬液，在37℃静置30min。轻轻吸去上清，用温浴PBS轻轻洗2遍。
3.200ul2％－4％多聚甲醛固定，在37℃静置30min。用温浴PBS轻轻洗3遍。
4.加入100μl封闭液（小鼠血清，BSA等），在室温静置30min。轻轻吸去上清，用温浴PBS轻轻洗2遍，然后加入荧光抗体标记，在室温静置30min。轻轻吸去上清，用温浴PBS轻轻洗4－6遍。（可根据实验要求选择胞内或/和胞外染色，直标或使用二抗，具体流程见相应实验方法）
5.将血盖片取下来，滴加20ul的缓冲甘油，放在事先清洗好的载玻片上，用指甲油封片。然后将片子4℃避光保存，上镜观察。
6. 检测结果用LSM 5 Image Brower软件分析
（以上信息转自丁香园，仅供参考）