粗多糖提纯的方法有哪些

西安市天园生物制剂厂
大豆粗多糖：是从大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的总称，大豆中的寡糖属于а-半乳糖苷类，包括棉籽糖、水苏糖和Vabascose.

（1）、促进双歧杆菌的增殖：人体虽然不能直接利用粗多糖，但是粗多糖可被肠内细菌利用，并且能促进双歧杆菌的增殖。双歧杆菌是一种厌氧革兰氏阳性细菌，是维护和保持肠道菌群平衡的一个极为重要的因素，也是判断肠内外环境是否正常的一个可靠依据。
（2）、抑制病原菌：大豆粗多糖能促进双歧杆菌的增殖，从而抑制有害细菌如产生梭状芽孢杆菌的生长。双歧杆菌能发酵粗多糖产生短链脂肪酸和一些抗菌素物质，从而可抑制外源致病菌和肠内固有腐败细菌的生长繁殖。
（3）、防止便秘、腹胀，促进消化，调节胃肠功能：肠道内的双歧杆菌发酵粗多糖产生大量的短链脂肪酸（主要是醋酸和乳酸），能刺激肠道蠕动，从而促进消化，防止便秘的产生。
（4）、增强免疫功能：如果人较长期的食用无细菌食物，肠道就会因为缺少刺激而使其产生抗体的能力下降，从而容易诱发疾病。食用粗多糖，促进双歧杆菌的增殖，将对肠道免疫细胞产生刺激，提高其产生抗体的能力从而起到防治疾病的效果。

一、多糖的提取
1 热水浸提法
其步骤为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥
2 微波辅助提取法
3超声波辅助法与常规提取法相比，具有提取时间短、产率高、无需加热等优点[17]。
4 索氏提取法：（索氏提取器中，石油醚）
5 醇提法：（乙醇）
醇提法方法简单，易于操作，但提取率较低，乙醇使用量大，不宜大规模提取使用。
6 其它方法：
多糖的提取方法还有稀碱液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等。但由于稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，因而很多试验中避免采用稀碱液浸提法和稀酸液浸提法。
二、多糖的纯化
多糖中杂质除去方法 粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质，必须分别除去。
1 除蛋白质常用的方法有
1) 沙维积法（Sevag法）：
2) 三氟三氯乙烷法
3) 三氯醋酸法
4) 酶解法：在样品溶液中加入蛋白质水解酶，如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶等，使样品中的蛋白质降解。通常将其与Sevag法综合使用除蛋白质效果较好。
5 )盐酸法：取样品浓缩液，用2mol/L盐酸调节其PH至3，放置过夜，在3000r/min条件下离心，弃去沉淀，即脱去蛋白质。
6) 其它方法：可以加入5%ZnSO4溶液和饱和Ba(OH)2溶液，振荡后离心去蛋白。此法除蛋白不够彻底，可结合Sevag法使用。还可在提取液中加入50%的TCA溶液至沉淀完全，在4000r/min的条件下离心10min，收集上清液，即为除蛋白液。
还有人使用4:1的氯仿-乙醇溶液除蛋白，将混合液清摇，再静置，取上清液。此过程需重复多次方可除尽蛋白。
除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验，观察在280mm处是否有吸收，如果无吸收则表明蛋白质已经除尽。
2 除色素
1)活性炭
2)弱碱性树脂: 对于植物来源的多糖，可能含有酚型化合物而颜色较深，这类色素大多呈负性离子，不能用活性炭吸收剂脱色，可用弱碱性树脂DEAE纤维素或DuoliteA－7来吸附色素。
3)氧化脱色: 若糖和色素时结合的，易被DEAE纤维素吸附，不能被水洗脱，这类色素可进行氧化脱色：以浓氨水或NaOH液调至PH8.0左右，50℃以下滴加H2O2至浅黄色，保温2小时。
4)乙醚和无水乙醇洗涤：依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇洗涤多糖，即可得到较为纯净的多糖。此法较为简单，便于操作，多糖损失也较小。
5）用4:1的氯仿-正丁醇除色素。操作简单，多糖有一定损失。
6）发酵来源的多糖颜色一般较浅，色素含量较少，一般可不除色素。
3 除低聚糖等小分子杂质
1）采用逆向流水透析法。即准备好一桶蒸馏水，用一根导管将水通入透析袋的烧杯底部，另用一根导管将水引出，根据水量控制流速，使水缓慢流动48小时。这样得到的就是多糖的半精品。
2）利用溶液浓度扩散效应，将分子量小的物质如无机盐、低聚糖等从透析袋渗透到袋外的蒸馏水中，不断换水即可保持浓度差，从而除尽小分子杂质。具体的做法是根据多糖溶液的体积截取相应长度的透析袋，用透析夹夹住一端，灌入多糖液，离液面2－3cm处夹紧透析袋，置于一大烧杯中，注入蒸馏水至完全浸没透析袋后，用磁力搅拌器慢速搅拌，每12小时换一次水，重复3－4次。