取下一段目的基因要切两次，也就是说这里切的两次可以分两种不同的酶来切，同样的，载体也需要切两次同样也是用这两种酶来切，这样有两组碱基的互补配对，就可以避免载体和载体配对以及目的基因和目的基因配对。（不太确定啊。。。。。）
限制性内切酶识别特定的酶切位点，作用于DNA分子链上磷酸二酯键，同种限制酶才能切割出相同的粘性末端。连接时，相同的粘性末端通过碱基互补配对，在DNA连接酶的作用下形成磷酸二酯键。基因工程的主要步骤：1、目的基因的获得；2、目的基因与表达载体的连接；3、表达载体向宿主的转化。
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