载体与插入片段比例一般是1:10，通过测定DNA浓度来调整。单酶切片段插入时，载体一定要去磷酸化，载体易自连；双酶切二者比例要适当，比例不对，载体也会自连，因为微生物有自己的修护系统。
一般通过跑胶验证时两者条带的亮度来确定，大概比例要1:1假阳性一般都是比例不对造成的，但还有其他原因，比如酶连的时间等等
