条件:
①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。
②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。
③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。
④容易从宿主细胞中分离纯化出来, 这才便于重组操作。
⑤有容易被识别筛选的标志,当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作
克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的 外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖。常见 的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。
扩展资料:
分子克隆的意义和应用:
1、在医学方面
利用分子克隆技术已将胰岛素,人、牛和鸡的生长激素、人的干扰素、松弛素、促红细胞生长激素、乙型肝炎病毒抗原和口蹄疫病毒抗原的基因制成工程菌,利用发酵工业进行了大规模生产。还可提高微生物本身所产生的蛋白酶类和抗生素类药物的产量。
2、在基因治疗方面
通过遗传工程看到癌细胞具有逆转为正常细胞的可能性,例如SV40病毒引起的小鼠肿瘤细胞,在温度高时可逆转为正常细胞。为治疗半乳糖血症,用带有大肠杆菌乳糖操纵子的λ噬菌体去感染半乳糖血症患者的离体培养细胞,发现这种细胞的半乳糖苷酶达到了正常水平,并确实能代谢半乳糖。
3、在工业生产方面
以分子克隆技术为主体的基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程,四者紧密联系、常综合利用。许多化学试剂如丙烯酸、己二酸、乙二醇、甲醇、环氧乙烷、乌头酸和水杨酸等都可能利用分子克隆技术得到产品。
在环境保护方面,人们根据需要进行基因操作,将某种微生物的基因转入另一微生物,创造一些对有害物质降解能力更强的新菌种,以分解工业污水中的有毒物质。在食品工业方面,细菌可为人类生产有价值的蛋白质、氨基酸和糖等。
4、在农业生产方面
植物遗传工程对提高农作物的产量、培育新的农作物品种提供了可能。有许多外源基因导入植物获得成功。
参考资料来源:百度百科-分子克隆
参考资料来源:百度百科-克隆载体
必备:
1.复制起始位点:可在工具细胞内进行复制
2.多克隆位点:可插入外源基因
可选:
3.筛选基因:如抗性或显色基因,可用于转化菌种的筛选
《基因工程》上的说法是:
1.自主复制性
2.可扩增性
3.可转移性
4.不相容性
(1)在宿主细胞内能独立复制。
(2)有选择性标记。
(3)有一段多克隆位点。 外源DNA插入其中不影响载体的复制。
(4)分子量小,拷贝数多。
(5)容易从宿主细胞中分离纯化。
自我复制的能力,标记基因