目的基因连入载体转化到大肠杆菌中目的基因的大小怎么计算

2025-03-10 05:00:20
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(1)构建基因表达载体时,需要用限制酶BamH
I切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒,再用DNA连接酶将目镜基因和质粒连接形成重组质粒,再与大肠杆菌感受态细胞混合.因为重组质粒含有氨苄青霉素抗性基因,所以最后将混合物接种在含有氨苄青霉素平板培养基上培养,以筛选含有重组质粒的大肠杆菌.(2)①第1组实验,培养基上不含大肠杆菌,说明大肠杆菌感受态细胞和平板培养基符合实验要求.
②第2组平板培养基菌落数目最大,说明大肠杆菌细胞内含有为切割的载体,进一步推知大肠杆菌感受态细胞能够摄取质粒.
③第3组平板培养基菌落数目较多,说明大肠杆菌已经成功导入重组质粒,也证明DNA连接酶和限制酶具有生物活性,能将目的基因和质粒连接形成重组质粒.同理,第4组实验用来检验碱性磷酸酶是否具有活性.
④比较第4组和第5组实验结果可知,实验中用碱性磷酸酶处理载体可以降低仅有载体的菌落数,增加携带重组质粒的菌落比例.故答案:(1)含目的基因的DNA与载体(或质粒)
DNA连接酶
氨苄青霉素(2)①大肠杆菌感受态细胞和平板培养基
②摄取载体(或质粒、外源DNA)
③DNA连接酶和限制
碱性磷酸
④重组质粒(或重组DNA)