可以，但不建议。因为过低的退货温度（如45）会使引物与模板产生非特意性配对，从而使pcr结果有很多非特异条带，所以在设计引物的时候尽量设计退火温度为55左右。。个人经验，仅供参考
可以，不过没必要，不然再次加热需要更多能量。
我最低用过49度，再低没试过。
