全血DNA提取用哪种抗凝剂好

2024-11-13 10:21:30
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回答1:

全血基因组DNA提取试剂盒作用原理: 全血基因组DNA提取试剂盒特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 全血基因组DNA提取试剂盒使用说明: 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的0.lmL-1mL血液样品): a、在血液样品中加入2-3倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,12000rpm离心1min,小心吸去上清,沉淀应为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复以上述步骤一次。向沉淀中加200μL溶液YA,振荡至彻底混匀。 b、 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为5-20μL,不需要再用红细胞裂解液处理,直接加200μL溶液YA,振荡至彻底混匀。 向悬浮液中加入20μL 的RNase A (10mg/mL),充分颠倒混匀,室温放置10min。 加入20μL的蛋白酶K( 10mg /mL ),充分颠倒混匀,65℃水浴消化30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。 加入200μL溶液YB,再加入200μL无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。 12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 向吸附柱中加入600μL漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200μL经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。 离心所得洗脱液可再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。 全血基因组DNA提取试剂盒注意事项: 本试剂盒置于室温( 15 -25℃) 干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2 -8℃。 常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。 绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20μL,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。 洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响;若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。

回答2:

都是使用粉红色管帽的,抗凝剂为EDTA的管子收集样本。

回答3:

EDTA比较好。。肝素会影响过程