为什么大肠杆菌经过质粒转化后铺板后生长的菌落大小不一致

大肠杆菌电转化感受态细胞制备
第一天：
1.
将适合菌株（如xl1-blue,
dh5α）置于lb或其他营养丰富的培养基上，在37°c下过夜培养
2.
高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用
3.
准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用
第二天：
4.
转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml
lb（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中
5.
37°c下剧烈振荡培养2-6小时
6.
定时监控o.d.600值（培养1小时后每半小时测定一次）
7.
当o.d.600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）
8.
细胞在4°c
5000g下离心15分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在4°c的10%甘油中保存一两天）
9.
用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升），然后加水稀释至离心管的2/3体积。
10.
照上面步骤重复离心，小心弃去上清液
11.
照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞
12.
离心，弃上清液
13.
用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞
14.
照上面步骤离心，小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）
15.
用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml
16.
将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°c保存
转化方法:1.
在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl
dna
，冰上培育约5分钟
2.
添加1-3μl
dna
，冰上培育约5分钟
3.
转移dna/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器（无泡）中
4.
加载p1000，准备好300μl
lb
或
2xyt
5.
对电穿孔容器进行脉冲（200
欧姆,
25μfd,
2.5
千伏）（检查时间常数，应该在3以上）
6.
立即添加300μl
的lb或2xyt至电穿孔容器中
7.
37°c下培养细胞40分钟至1小时以复原
8.
转移细胞至适当的选择培养基上培养
大肠杆菌感受态细胞制备及转化中的影响因素

转入空载质粒、含有插入的DNA片段、以及少量具有抗性的菌落在选择培养基上受到的选择压不同，生长速率不一致。